РНК вируса гепатита С может быть обнаружена в любой биологической жидкости человека, кроме крови, начиная со слюны и заканчивая жидкостью, которая скапливается в животе при развитии поражений печени. Естественным резервуаром или источником заражения обычно является человек-носитель вирусной инфекции. Но способность вируса гепатита С долгое время бессимптомно существовать в организме приводит не только к опасному состоянию больного, но и к вероятности потенциального заражения контактирующих с ним, в том числе посторонних людей.
Современные методы исследования позволяют обнаружить даже незначительное присутствие вирусных РНК. Для этого существуют методы, изобретенные в молекулярной биологии и поставленные на службу современной медицине в качестве эффективной диагностики.
Содержание
Характер проблемы
В отличие от других вирусов гепатита человека, содержащих ДНК, опасный ВГС затруднительно выявить обычными лабораторными методами, и ранее проводимые исследования только показывали внешнюю несхожесть вируса с уже известными науке.
Иммунодиагностика для вируса гепатита С неэффективна, потому что процесс заболевания протекает крайне своеобразно:
- Вирус быстро мутирует, а иммунный ответ организма запаздывает и не может бороться выработанными средствами, потому что они на момент продуцирования уже неэффективны.
- Период инкубации вируса в клетках может составлять до 26 недель, а это означает, что клиническая диагностика, особенно в безжелтушной, самой характерной для ВГС форме, практически невозможна.
- Лабораторная диагностика позволят выявить присутствие патогенного агента только через 6 месяцев в лучшем случае, когда появляются антитела к вирусу. Фульминантное течение, с которым пока невозможно справиться, встречается только у одного человека из ста.
- Отсутствие своевременной диагностики приводит к постоянному присутствию вируса в организме человека, с незначительными признаками, которые легко отнести к переутомлению или расстройствам пищеварения. И все это время он является потенциальным источником заражения, даже не подозревая о собственном вирусоносительстве.
- Если происходит репликация вируса во внепеченочном пространстве, у больного могут развиваться и тяжелые аутоиммунные реакции, и летальный исход от их присутствия.
- При подозрении на ОГС назначаются лабораторные анализы – как обязательные, так и дополнительные, при ХГС прибавляется обязательная дифференциальная диагностика, которую проводят с помощью таблицы маркеров. Однако общие анализы мочи и крови, биохимическое исследование и даже иммунотитрование недостаточно информативны.
- Выявление антител к ВГС и HBsAg – всего лишь свидетельство о контакте организма с вирусом. Но никаких объективных данных о его пребывании, развитии или угасании, репликации или ее отсутствии, иммунодиагностика не представляет. Общие антитела к Hepatitis C Virus можно трактовать вариабельно и их обнаружение не дает возможности определиться с врачебной тактикой.
Что представляет собой метод ПЦР
Метод полимеразной цепной реакции – диагностическая технология, в которой были использованы наработки молекулярной биологии. Ученые Хьелль Клеппе и Кэри Муллис сделали революционное открытие в своей области, разработав проведение ПЦР, позволяющей бесконечно увеличивать количество копий по заданной программе. Выбрав для копирования РНК вируса гепатита С можно выявить с помощью комплементарных праймеров и ДНК-полимеразы даже самое незначительное количество, вплоть до одиноких и не связанных между собой фрагментов.
Суть проводимого анализа состоит в выявлении присутствия вирусных рибонуклеиновых кислот задолго до того, как организм начнет вырабатывать иммунный ответ, который может обнаружить анализ на антитела к вирусу.
Никакие мутации не могут помешать обнаружению РНК, если есть соответствующая программа и специальные праймеры с полимеразой. В амплификаторе обнаруженная молекула тиражируется до уровня, который позволяет получить дальнейшую информацию. В современной медицине есть амплификаторы, способные выполнять и другие функции – например, сохранять размноженные молекулы на протяжении нужного времени или содержать флуоресцентные детекторы для работы с биоматериалом. Второе название анализа РНК на гепатит С (определение РНК вируса HCV-RNA) – ПЦР гепатита С. Это продуктивный способ выявления при исследовании крови человека частичек вирусного генома, проводимый в двух видах – качественном и количественном.
Качественный анализ
В настоящее время несколько менее актуален, чем количественный, потому что позволяет только определить присутствие вируса. Вариантов ответа – всего два – либо Hepatitis C Virus есть, либо его наличие не обнаружено. Успешность проводимой диагностики может быть легко поставлена под сомнение. Иногда чувствительность анализа недостаточно высокая, а концентрация вируса в крови настолько низкая, что тестовая система не может ее обнаружить. То есть даже внешне однозначный вариант ответа – вируса нет, на самом деле означает или его отсутствие, или концентрацию, которая пока недоступна проводимому тесту.
У конкретного пациента может быть низкий удельный уровень содержания РНК вируса из-за того, что он принимает по другому поводу противовирусные препараты. Но и положительный ответ тоже малоинформативен, потому что не дает представления о том, на какой стадии находится заболевание. Это может быть первичное заражение, развитие патологического процесса, его угасание, и даже то, что осталось после самоисцеления пациента, что тоже иногда случается.
Количественный анализ
Нередко отождествляется с вирусной нагрузкой, однако, дает и некоторые дополнительные данные. Получение результата производится методом подсчета количества единиц однониточного РНК вируса в миллилитре крови (другого биоматериала). Самая высокая чувствительность – у транскрипционной амплификации.
Пока этот метод находится в стадии разработки и есть только в крупных медицинских центрах, но это позволяет увидеть10 МЕ или 25 копий в 1 мг, в то время как более дешевый метод разветвленной ДНК видит только500 МЕ (1250 копий), то есть эффективность его в десять раз ниже.
С помощью количественного анализа решается сразу несколько задач. Можно:
- диагностировать заражение на том этапе, когда остальные методы бессильны (в ничем не проявляемом инкубационном периоде);
- определить самоизлечение, в то время как остальные методики дадут картину заражения, ориентируясь на выработанные организмом антитела;
- составить представление об агрессивности генома и степени поражения клеток, с помощью присутствующих компонентов;
- осуществлять мониторинг концентрации РНК вируса при назначении медикаментозной терапии – дает ли она ожидаемые результаты, или необходима смена врачебной тактики.
Генотипирование
Вирус гепатита С – это общее собирательное название нескольких вариантов генотипа, официально признанных – 6, однако, в специальной литературе называются разные цифры (от 8 до 11). Распространенность генотипа на определенной территории не означает, что его нельзя обнаружить на другой, нехарактерной. Генотипирование выявляет не только типы генома, получившие статус квазивируса, но и его мутировавшие разновидности, в то время как тест на антитела не смог бы обнаружить присутствие видоизмененной инфекции.
В некоторых случаях проведение генотипирования тоже может привести к неудачным результатам. Если соответствующего реагента в лаборатории нет в наличии, выдается заключение о невозможности проведения типирования РНК, хотя субтип генома присутствует в организме и развивается со всеми вытекающими из этого последствиями.
Генотипирование РНК вируса гепатита С дает три результата – обнаружен конкретный генотип (субтип), есть РНК редкого вида, для идентификации которого нет ресурсов, или полное отсутствие, означающее, что пациент здоров или концентрация однонитчатой РНК совсем незначительна.
Загрузка...